ELISA試劑盒實驗的標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定的重復(fù)性差，這是什么原因造成的？

答：試驗的標(biāo)準(zhǔn)曲線和測定的重復(fù)性差，這是典型的由測定操作引起的問題，常見原因如下：

a)可能原因：加樣本及試劑量不準(zhǔn)；孔間不一致；

解決方法：校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密。

重復(fù)某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近；

重復(fù)測定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性；

樣品稀釋前應(yīng)充分混勻。

b)可能原因：加樣過快，孔間發(fā)生污染；

解決方法：重復(fù)測定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性；加樣不要過快。

c)可能原因：加錯樣本；

解決方法：檢查記錄和試劑，是否加錯樣本。

d)可能原因：加樣本及試劑時，加在孔壁上部非包被區(qū)；

解決方法：加樣槍頭不要貼壁。

e)可能原因：不同批號試劑盒中組分混用；

解決方法：不同批號試劑盒中組分不可混用。

f)可能原因：溫育時間、洗板、顯色時間不一致；

解決方法：檢查時間是否一致。

g)可能原因：孔內(nèi)污染雜物；

解決方法：離心樣品，排除雜物。

h)可能原因：試劑/樣品沒有混勻；

解決方法：充分混勻樣品和試劑。

i)可能原因：血清標(biāo)本未*凝固即加入，反應(yīng)孔內(nèi)出現(xiàn)纖維蛋白凝固或殘留血

細(xì)胞，易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)等。

解決方法：待血清標(biāo)本*凝固后做試驗。